Primer diagnóstico de resistencia al fipronil en la garrapata común del ganado Boophilus microplus
Investigaciones
Primer diagnóstico de resistencia al fipronil en la garrapata común del ganado Boophilus microplus
Cuore, U.[1]; Trelles, A.2; Sanchis, J.3; Gayo, V.1; Solari, M.A1.
1- INTRODUCCIÓN
Una de las causas que a nivel mundial explica el fracaso que se ha tenido en la lucha por erradicar la garrapata Boophilus microplus es el desarrollo de resistencia que ha presentado este parásito a los distintos principios activos que se han utilizado desde el comienzo de su control. Uno de los pocos ejemplos que existen de país continental que ha erradicado este parásito es el de los Estados Unidos, que luego de más de 50 años de lucha activa logró este objetivo en el año 1956. Probablemente ayudado en gran medida, por no ser la resistencia parasitaria en ese momento un impedimento en una campaña de erradicación como hoy sí lo representa (10).
Esta resistencia parasitaria, es un proceso que en los últimos años se ha acelerado y los nuevos principios activos puestos en el mercado tienen un menor tiempo de vida útil. La hipótesis que se propone para explicar este fenómeno es la similitud que puede haber en el mecanismo de acción entre distintos principios activos o en la vías similares de detoxificación metabólica que sufre el acaricida. Un ejemplo de ello es la velocidad con que se desarrolló en Australia la resistencia a los Piretroides Sintéticos, ya que un mecanismo propuesto para explicarla es la presencia de un gen denominado «kdr», que es el mismo gen involucrado en el desarrollo de resistencia al DDT (11).
La Industria Farmacéutica juega un rol muy importante en la investigación y desarrollo de nuevas moléculas. Si bien en la década del 80 el gran descubrimiento fue el de los endectocidas, actualmente la perspectiva a corto y mediano plazo no es muy favorable ya que la Industria está abocada a atender las necesidades del hemisferio norte donde la garrapata no es problema (16).
Frente a este contexto se han propuesto cambios en el esquema tradicional de los tratamientos, buscando alternativas en el Control Integrado de Parásitos y tratando entre otros objetivos de prolongar la vida útil de los acaricidas químicos. Los países que invierten recursos en investigación básicamente están abocados en encontrar alternativas no químicas de control para integrarlas dentro de un modelo epidemiológico a los tratamientos químicos tradicionales (8) y por otro lado en descubrir técnicas moleculares que permitan diagnosticar y monitorear la evolución de la resistencia para lograr un manejo racional de la misma. (Jonsson, N. comunicación personal 2005).
En Uruguay, hasta el momento de los 6 grupos químicos que se utilizan en la campaña de erradicación del Boophilus microplus (Organofosforados, Piretroides Sintéticos, Amidinas, Fipronil, Lactonas Macrociclicas, Fluazuron) se ha diagnosticado resistencia solamente a los Organofosforados (1978), a los Piretroides sintéticos (1994) y a sus mezclas (1998). Los comienzos en el control de la garrapata en el país fueron en base a baños de inmersión cargados con Arsenicales comprobándose en 1950 cepas resistentes, las cuales fueron controladas con BHC (Lindano). Estos reportes de resistencia no fueron comprobados por técnicas de laboratorio (3).
Esto sitúa al país en una posición de privilegio en relación a otros, que como el nuestro toman distintas acciones de control del Boophilus microplus, ejemplos son Argentina y Brasil en lo regional, México y Australia en lo extra regional, los cuales tienen diagnósticos de resistencia a varios de los grupos químicos mencionados.
En Brasil por ejemplo, se diagnosticó hasta el momento resistencia a los Organofosforados, Piretroides Sintéticos, Amidinas y Lactonas Macrocíclicas (14). En el caso del Fipronil, no figura en la literatura internacional la ocurrencia de resistencia del Boophilus microplus a esta molécula.(Annual W.G.P.R. Meeting October 2005, FAO-EMBRAPA, Campo Grande- Brazil). En la reunión anual del Working Group on Parasite Resistance del 2006 fue realizada la presente comunicación, no habiéndose mencionado otras sospechas de resistencia al Fipronil (Annual W.G.P.R. Meeting November 2006, FAO – Faculty of Onderstepoort, Pretoria – South Africa) Dicha molécula fue registrada en el país en 1997 (Ectoline – Merial S.A.) y luego de 8 años de uso se presentan la primera población con sospecha fundada de resistencia.
Su modo de acción es a nivel del canal de cloro de las células del sistema nervioso central, inhibiendo el flujo de iones cloruro por interferencia del mediador
químico GABA provocando una muerte por hiperexcitación del parásito (21).
El presente trabajo describe la confirmación del diagnóstico de una población de campo resistente al Fipronil.
2- MATERIALES Y MÉTODO Antecedentes
En mayo de 2005, se recibió una población de garrapatas ingurgitadas provenientes de un establecimiento criador, cerrado al ingreso de animales, del departamento de Salto, 31,15º Lat.Sur – 57º Long. Oeste, Paraje Sopas, Seccional Policial Nº 14.
El uso de Fipronil en dicho establecimiento, comenzó en la temporada 2003-2004, y luego de 13 tratamientos, en mayo de 2005 (temporada 2004-2005) se hace evidente el problema de falta de la eficacia a campo. Al no existir hasta ese momento, una prueba diagnóstico de la resistencia a Fipronil in vitro se realizó una prueba de eficacia de establo (in vivo) (18). Las garrapatas recibidas se ubican en cajas de Petri y se ponen a cultivar en cuarto estufa a 27 º C y más de 80 % de humedad durante 14 días. Posteriormente la masa de huevos depositados se coloca en tubos para su eclosión y permanecen en el cuarto estufa durante 25 días más. Una vez obtenidas las larvas infestantes, la cepa fue mantenida en un animal y luego de haber realizado ensayos preliminares in vivo, se procede a realizar la prueba de establo con la tercera generación sin que haya sufrido presión química.
Diseño experimental
Animales de prueba e instalaciones
La prueba se realizó en la DILAVE “Miguel C. Rubino”, en boxes experimentales para colectar garrapata de acuerdo al diseño descrito por Roulston y Wilson (1964) (18).
Se utilizaron 9 animales de la raza Hereford con un promedio de peso de 150 kg provenientes de un rodeo de cría libres de garrapatas y sin exposición previa a garrapaticidas. Su origen es de campos que posee la DILAVE con fines experimentales. Los animales fueron alimentados en base a ración y alfalfa pelleteada y se suministró agua ad libitum.
Infestación, formación de grupos y tratamientos
El presente trabajo describe la confirmación del diagnóstico de una población de campo resistente al Fipronil.
Se formaron 3 grupos de 3 animales cada uno, 2 de los cuales se desafiaron con la
población de garrapatas con sospecha de resistencia (Grupo I y II) y el tercer grupo con la cepa sensible de referencia Mozo (Grupo III). Los animales fueron infestados con 100 mg. de larvas (2000 ejemplares), 2 veces por semana desde 25 días previos al tratamiento.
Dos grupos fueron tratados con Ectoline (Fipronil 1% de aplicación por derrame dorsal) del Laboratorio Merial S.A. analizado por el departamento de evaluación química de la DILAVE, hallándose a concentración correcta. Uno de los grupos desafiado con la población de garrapatas con sospecha de resistencia (Grupo II) y otro infestado con cepa Mozo (Grupo III), el tercer grupo permaneció como testigo de la prueba sin tratamiento (Grupo I). En el cuadro 1 se resume la formación de grupos y tratamientos.
El día del tratamiento, previo peso de los bovinos y de acuerdo a las especificaciones del fabricante, se realizó la aplicación del producto.
Recolección de garrapatas
Diariamente de cada box se colectaron las teleoginas, se contaron, se pesaron y una alícuota de 20 ejemplares se cultivó a 27 ºC y 80 % de humedad para estudiar el comportamiento reproductivo. A los 14 días se retiraron las xenoginas y se pesó la masa de huevos depositada y se esperaron 25 días más para hacer la estimación visual del porcentaje de eclosión.
Período del estudio: febrero – abril de 2006
Con los datos obtenidos se aplicaron las siguientes fórmulas para evaluar la eficacia del producto expresada como porcentaje de control (%C).
Porcentaje de sobrevivencia de hembras ingurgitadas ( P.S.) (19)
A= Promedio de teleoginas caídas de los testigos, por vacuno y por día durante los tres días pre-tratamiento.
B= Promedio de teleoginas caídas de los tratados, por vacuno y por día durante los tres días pre-tratamiento.
C= Promedio de teleoginas caídas en un día determinado de los testigos.
D= Promedio de teleoginas caídas en un día determinado de los tratados.
Índice de reproducción (I.R.) (6)
Cuadro 1. Formación, infestación y tratamiento de grupos.
Grupo | n | Garrapata | Infestación | Tratamiento |
I - Testigo | 3 | Sospecha Resistencia | 100 mgr/Infestación 2 veces/semana durante 25 días | Sin tratamiento |
II - Tratado | 3 | Sospecha Resistencia | 100 mgr/Infestación 2 veces/semana durante 25 días | Fipronil 1% |
III - Mozo | 3 | Sensible Referencia | 100 mgr/Infestación 2 veces/semana durante 25 días | Fipronil 1% |
Porcentaje de control (% C). (1)
Se Calcula:
- %C. diario.
- %C. del día + 1 al + 7. Para observar acción sobre garrapata adulta.
- %C. del día + 8 al + 14. Para observar acción sobre ninfas.
- %C. del día +15 al + 22. Para observar acción sobre larvas.
- %C. total del día +1 al +22. Para conocer el %C sobre el total del ciclo parasitario
3- RESULTADOS
La eficacia medida para los distintos estadios parasitarios y para el total del ciclo es la siguiente (cuadro 2):
Cuadro 2. Planilla diaria de Prueba de Establo. Población con sospecha de resistencia al Fipronil, cepa Mozo
de referencia tratada y sin tratamiento
Grupo I - Control: Población con sospecha de resistencia al Fipronil sin tratamiento |
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DÍAS | HEMBRAS CAIDAS TOTALES | HEMBRAS CAIDAS PROMEDIO | PESO HEMBRAS CAIDAS | PESO HEMBRAS PROMEDIO | HEMBRAS INCUBADAS | PESO HEMBRAS INCUBADAS | GRAMOS HUEVOS | PROMEDIO GRAMOS HUEVOS | PORCENTAJE ECLOSION | VALOR A | VALOR C | REPRODUCCIÓN ESTIMADA (R.E) | INDICE REPRODUCCIÓN (I.R) |
-3 | 619 | 206 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 275,22 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | |
-2 | 636 | 212 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 253,10 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | |
-1 | 1222 | 407 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 253,10 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | |
1 | 763 | 254 | 277,6 | 0,372 | 20 | 6,20 | 2,72 | 0,14 | 75 | 253,10 | 254,33 | 32,90 | 2594,2 |
2 | 559 | 186 | 147,6 | 0,295 | 20 | 5,72 | 2,73 | 0,14 | 95 | 253,10 | 186,33 | 45,34 | 2416,3 |
3 | 309 | 103 | 125,63 | 0,455 | 20 | 6,40 | 2,90 | 0,15 | 95 | 253,10 | 103,00 | 43,05 | 1418,8 |
4 | 276 | 92 | 146,8 | 0,583 | 20 | 5,63 | 2,83 | 0,14 | 80 | 253,10 | 92,00 | 40,21 | 1041,4 |
5 | 680 | 227 | 196,6 | 0,299 | 20 | 6,01 | 3,30 | 0,17 | 90 | 253,10 | 226,67 | 49,42 | 3366,0 |
6 | 733 | 244 | 202 | 0,282 | 20 | 6,30 | 3,10 | 0,16 | 90 | 253,10 | 244,33 | 44,29 | 3408,5 |
7 | 727 | 242 | 202,7 | 0,285 | 20 | 6,35 | 3,31 | 0,17 | 85 | 253,10 | 242,33 | 44,31 | 3409,0 |
8 | 577 | 192 | 155 | 0,282 | 20 | 6,16 | 2,96 | 0,15 | 70 | 253,10 | 192,33 | 33,64 | 1992,6 |
9 | 790 | 263 | 260,11 | 0,336 | 20 | 5,42 | 2,50 | 0,13 | 80 | 253,10 | 263,33 | 36,90 | 2633,3 |
10 | 390 | 130 | 229,7 | 0,611 | 20 | 5,90 | 2,65 | 0,13 | 85 | 253,10 | 130,00 | 38,18 | 1464,1 |
11 | 542 | 181 | 107,71 | 0,210 | 20 | 5,70 | 2,38 | 0,12 | 90 | 253,10 | 180,67 | 37,58 | 1934,9 |
12 | 1060 | 353 | 171,28 | 0,171 | 20 | 5,52 | 2,20 | 0,11 | 70 | 253,10 | 353,33 | 27,90 | 2720,7 |
13 | 978 | 326 | 124,8 | 0,133 | 20 | 5,80 | 2,35 | 0,12 | 80 | 253,10 | 326,00 | 32,41 | 3064,4 |
14 | 821 | 274 | 204,14 | 0,264 | 20 | 5,82 | 2,88 | 0,14 | 95 | 253,10 | 273,67 | 47,01 | 3743,8 |
15 | 501 | 167 | 181,09 | 0,400 | 20 | 5,90 | 2,90 | 0,15 | 90 | 253,10 | 167,00 | 44,24 | 2179,4 |
16 | 445 | 148 | 185,6 | 0,437 | 20 | 5,98 | 2,70 | 0,14 | 90 | 253,10 | 148,33 | 40,64 | 1802,3 |
17 | 515 | 172 | 144,07 | 0,301 | 20 | 6,25 | 3,53 | 0,18 | 80 | 253,10 | 171,67 | 45,18 | 2423,9 |
18 | 378 | 126 | 96,87 | 0,278 | 20 | 6,03 | 2,83 | 0,14 | 90 | 253,10 | 126,00 | 42,24 | 1604,6 |
19 | 413 | 138 | 82,18 | 0,213 | 20 | 5,77 | 2,59 | 0,13 | 80 | 253,10 | 137,67 | 35,91 | 1426,2 |
20 | 777 | 259 | 164,48 | 0,217 | 20 | 6,06 | 2,90 | 0,15 | 80 | 253,10 | 259,00 | 38,28 | 3004,4 |
21 | 596 | 199 | 144,03 | 0,242 | 20 | 6,05 | 2,85 | 0,14 | 75 | 253,10 | 198,67 | 35,33 | 2123,3 |
22 | 284 | 95 | 271,62 | 1,006 | 20 | 5,61 | 2,13 | 0,11 | 75 | 253,10 | 94,67 | 28,48 | 756,2 |
23 | 198 | 66 | 283,65 | 1,533 | 20 | 6,00 | 2,32 | 0,12 | 85 | 253,10 | 66,00 | 32,87 | 650,8 |
24 | 364 | 121 | 129,9 | 0,375 | 20 | 6,24 | 2,70 | 0,14 | 90 | 253,10 | 121,33 | 38,94 | 1474,2 |
25 | 93 | 31 | 115,3 | 1,281 | 20 | 5,60 | 2,04 | 0,10 | 70 | 253,10 | 31,00 | 25,50 | 221,3 |
26 | 59 | 20 | 123,4 | 2,285 | 20 | 5,50 | 2,75 | 0,14 | 85 | 253,10 | 19,67 | 42,50 | 229,9 |
Grupo II - Tratado: Población con sospecha de resistencia al Fipronil tratado con Ectoline 1% |
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DÍAS | HEMBRAS CAIDAS TOTALES | HEMBRAS CAIDAS PROMEDIO | PESO HEMBRAS CAIDAS | PESO HEMBRAS PROMEDIO | HEMBRAS INCUBADAS | PESO HEMBRAS INCUBADAS | GRAMOS HUEVOS | PROMEDIO GRAMOS HUEVOS | PORCENTAJE ECLOSION | VALOR B | VALOR D | REPRODUCCIÓN ESTIMADA (R.E) | INDICE REPRODUCCIÓN (I.R) | PORCENTAJE SOBREVIVENCIA (P.S.) | PORCENTAJECONTROLDIARIO (% C) | |
-3 | 582 | 194 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 238,67 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | ||||
-2 | 580 | 193 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 239,00 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | ||||
-1 | 986 | 329 | 0 | 0,000 | 0 | 0,00 | 0,00 | 0,00 | 239,00 | 0,00 | 0,00 | 0,0 | ||||
1 | 1075 | 358 | 313,4 | 0,298 | 20 | 6,30 | 3,18 | 0,16 | 90 | 239,00 | 358,33 | 45,43 | 5127,8 | 162,5 | -97,7 | |
2 | 706 | 235 | 176,15 | 0,272 | 20 | 5,90 | 2,46 | 0,12 | 85 | 239,00 | 235,33 | 35,44 | 2460,4 | 133,7 | -1,8 | |
3 | 846 | 282 | 230,2 | 0,280 | 20 | 5,55 | 1,53 | 0,08 | 85 | 239,00 | 282,00 | 23,43 | 1833,7 | 289,9 | -29,2 | |
4 | 448 | 149 | 143,88 | 0,330 | 20 | 5,46 | 2,14 | 0,11 | 60 | 239,00 | 149,33 | 23,52 | 958,7 | 172,1 | 7,9 | |
5 | 449 | 150 | 130,09 | 0,300 | 20 | 5,23 | 2,34 | 0,12 | 85 | 239,00 | 149,67 | 38,03 | 1488,4 | 69,9 | 55,8 | |
6 | 495 | 165 | 115,5 | 0,261 | 20 | 5,46 | 2,64 | 0,13 | 90 | 239,00 | 165,00 | 43,52 | 1960,2 | 71,5 | 42,5 | |
7 | 275 | 92 | 73,95 | 0,284 | 20 | 5,47 | 1,86 | 0,09 | 70 | 239,00 | 91,67 | 23,80 | 596,8 | 40,1 | 82,5 | |
8 | 205 | 68 | 45,15 | 0,243 | 20 | 5,91 | 2,25 | 0,11 | 60 | 239,00 | 68,33 | 22,84 | 461,3 | 37,6 | 76,9 | |
9 | 101 | 34 | 13,55 | 0,226 | 20 | 5,54 | 2,41 | 0,12 | 45 | 239,00 | 33,67 | 19,58 | 182,6 | 13,5 | 93,1 | |
10 | 56 | 19 | 6,8 | 0,262 | 20 | 6,69 | 2,20 | 0,11 | 40 | 239,00 | 18,67 | 13,15 | 82,1 | 15,2 | 94,4 | |
11 | 52 | 17 | 8,9 | 0,228 | 20 | 4,76 | 1,87 | 0,09 | 65 | 239,00 | 17,33 | 25,54 | 105,3 | 10,2 | 94,6 | |
12 | 75 | 25 | 12,6 | 0,214 | 20 | 5,26 | 2,04 | 0,10 | 70 | 239,00 | 25,00 | 27,15 | 178,5 | 7,5 | 93,4 | |
13 | 57 | 19 | 11,89 | 0,243 | 20 | 4,96 | 2,10 | 0,11 | 70 | 239,00 | 19,00 | 29,64 | 139,7 | 6,2 | 95,4 | |
14 | 52 | 17 | 12,2 | 0,244 | 20 | 5,52 | 2,14 | 0,11 | 45 | 239,00 | 17,33 | 17,45 | 83,5 | 6,7 | 97,8 | |
15 | 64 | 21 | 15,51 | 0,250 | 20 | 5,03 | 1,66 | 0,08 | 25 | 239,00 | 21,33 | 8,25 | 44,3 | 13,5 | 98,0 | |
16 | 62 | 21 | 14,69 | 0,249 | 20 | 5,13 | 2,10 | 0,11 | 45 | 239,00 | 20,67 | 18,42 | 97,7 | 14,8 | 94,6 | |
17 | 90 | 30 | 16,62 | 0,210 | 20 | 5,07 | 2,23 | 0,11 | 65 | 239,00 | 30,00 | 28,59 | 217,4 | 18,5 | 91,0 | |
18 | 153 | 51 | 34,57 | 0,256 | 20 | 4,80 | 1,71 | 0,09 | 30 | 239,00 | 51,00 | 10,69 | 130,8 | 42,9 | 91,8 | |
19 | 141 | 47 | 27 | 0,213 | 20 | 5,80 | 2,16 | 0,11 | 30 | 239,00 | 47,00 | 11,17 | 152,3 | 36,2 | 89,3 | |
20 | 105 | 35 | 21,13 | 0,216 | 20 | 5,20 | 2,21 | 0,11 | 50 | 239,00 | 35,00 | 21,25 | 193,4 | 14,3 | 93,6 | |
21 | 108 | 36 | 22,99 | 0,219 | 20 | 5,56 | 2,15 | 0,11 | 30 | 239,00 | 36,00 | 11,60 | 116,1 | 19,2 | 94,5 | |
22 | 93 | 31 | 15,87 | 0,191 | 20 | 4,94 | 1,91 | 0,10 | 45 | 239,00 | 31,00 | 17,40 | 133,2 | 34,7 | 82,4 | |
23 | 84 | 28 | 15,9 | 0,212 | 20 | 4,70 | 1,86 | 0,09 | 35 | 239,00 | 28,00 | 13,85 | 91,1 | 44,9 | 86,0 | |
24 | 63 | 21 | 10,95 | 0,189 | 20 | 5,00 | 2,06 | 0,10 | 25 | 239,00 | 21,00 | 10,30 | 54,1 | 18,3 | 96,3 | |
25 | 57 | 19 | 9,97 | 0,203 | 20 | 4,73 | 1,88 | 0,09 | 30 | 239,00 | 19,00 | 11,92 | 53,6 | 64,9 | 75,8 | |
26 | 39 | 13 | 7,59 | 0,200 | 20 | 4,60 | 1,80 | 0,09 | 45 | 239,00 | 13,00 | 17,61 | 52,7 | 70,0 | 77,1 | |
Resumen de los IR y Porcentaje de Control del Grupo II | ||||||||||||||||
día 1+7 | día 8+14 | día 15+22 | día 1+22 | día 1+26 | ||||||||||||
Grupo I Control | IR | 17654 | 17553,8 | 14564 | 49772 | 53104,3 | ||||||||||
Grupo II Tratado | IR | 14425,97 | 1873,91 | 1040,87 | 16744,00 | 16995,40 | ||||||||||
% C | 18,29 | 89,32 | 92,85 | 66,36 | 67,99 |