ANEXO III: Protocolo de extracción y acondicionamiento de muestras para el diagnóstico de Huanglongbing (HLB)
1. MUESTRAS DE MATERIAL VEGETAL
1.1 Plantas de plantaciones comerciales, consumo propio, jardines y traspatios.
- Tomar las muestras de árboles con síntomas cortando dos ramas de unos 20 cm de longitud. Desinfectar las herramientas de corte con solución de hipoclorito de sodio al 1% antes de cada corte. Cada muestra se corresponderá a un árbol.
- Colocar las hojas y tallos envueltos en toallas de papel en una bolsa de polietileno con dispositivo de sellado tipo ziplock u otro tipo de sellado (Ej.: soldadura por calor). Las ramas que componen una muestra pueden, a su vez, cortarse a los efectos de acondicionarlas en función del tamaño de las bolsas.
- El responsable del envío de la muestra deberá identificar las mismas de la siguiente manera: Fecha, Lugar de producción, unidad de producción, variedad, edad del monte, responsable de la muestra, ubicación de la muestra (si es posible geo-referenciar),
- Sacar el aíre de la bolsa, cerrarla e introducirla en otra bolsa de polietileno más grande1.
- Sellar la bolsa y colocarla en una conservadora. Es deseable disponer de bolsas de gel refrigerante debiendo tener la precaución de que no entre contacto directo con las bolsas que contengan las muestras.
- Las muestras deberán enviarse preferentemente en conservadora que contenga refrigerante. De no disponerse de las mismas para su envío, acondicionar en envases adecuados para su transporte y remitirlas a última hora del día, previo aviso a la Unidad responsable de su recepción y remisión al Laboratorio.2
- Los Laboratorios Biológicos no recibirán muestras sin la correspondiente Solicitud de Diagnóstico debidamente completadas verificando la correcta identificación de las mismas.3
- En la medida de lo posible, enviar las muestras el mismo día de su colecta. En caso contrario conservarlas en frío a 4 - 5°C, en toallas de papel y dentro de bolsas de polietileno, para enviarlas los días lunes a jueves. Este criterio deberá ajustarse a la probable ocurrencia de feriados.
1.2 En lugares de producción de materiales de propagación (Viveros)
- En el caso de plantas con sintomatología atribuible a HLB destinadas a producir yemas o semillas de portainjerto, se tomará una muestra por planta sintomática siguiendo la misma metodología que se describe más arriba.
- En el caso de parcelas destinadas a la producción de plantas de vivero constituido con materiales del mismo origen, las muestras podrán componerse de varias plantas que presenten síntomas atribuibles al HLB.
- En caso de que el desarrollo de las plantas no sea el adecuado como para tomar muestras de ramas, se tomarán muestras de hojas con su correspondiente pecíolo.
- En el caso de muestras de hojas, cada muestra se compondrá de, al menos, 10 hojas y el acondicionamiento de las mismas se realizará de forma similar a lo descripto anteriormente.
2. MUESTRAS DE PSÍLIDOS VECTORES
2.1 Insectos adultos
- De acuerdo a la metodología definida para el monitoreo por DPA, cada muestra se compondrá con ejemplares adultos capturados en una “estación de muestreo” y la cantidad de individuos a remitir se corresponderá con la totalidad de la captura lograda.
- Los insectos se acondicionarán en alcohol 75% en frascos de polipropileno de, aproximadamente, 4 cm de diámetro y 7 cm de altura con tapa de rosca (Figura 1A).
- Para su envío se dispondrá de gradillas de poliuretano expandido de un espesor adecuado y con orificios del mismo diámetro que los frascos
- La identificación de las muestras se realizará con etiquetas adhesivas utilizando lápiz de grafo de manera de no borrarse ninguna inscripción en caso de ocurrencia de derrame de alcohol (Figura 1B).
- Los ejemplares conservados en alcohol podrán mantenerse por varios días y ser remitidos semanalmente previo aviso a la Unidad responsable de su recepción y envío a Laboratorio.
- Cada muestra deberá ser remitida a los Laboratorios Biológicos con su correspondiente planilla de Solicitud de Diagnóstico.
Figura 1. Recipientes y etiquetado de muestras a ser enviadas a los Laboratorios Biológicos.
2.2 Estados inmaduros (ninfas) de Psílidos vectores
- Las muestras de ninfas se acondicionarán del mismo modo que los ejemplares adultos.
- A diferencia de lo planteado para insectos vectores adultos, en el caso de las ninfas, en plantas comerciales, para consumo propio, jardines y traspatios, plantas productoras de o de semillas de portainjerto, la identificación de las muestras debería considerar la planta de la cual se tomó la muestra.
- En el caso de muestras de ninfas provenientes de plantas de vivero, la identificación debería referirse a la parcela de la cual fueron tomadas.
- Para la remisión de muestras de estados inmaduros los criterios serán los mismos que para insectos vectores adultos.
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1 En una bolsa de tamaño adecuado se podrán acondiciona varias muestras.
2 Se sugiere remitir a “retirar en agencia” de manera de proceder a su retiro a la mañana siguiente.
3 Se requiere una solicitud por muestra remitida.