Servicio de Clasificación Celular y Citometría de Flujo (SECIF-IIBCE)
Perfil
El Servicio de Clasificación Celular y Citometría de Flujo (SECIF) constituye una plataforma tecnológica de apoyo a investigadores en áreas básicas o aplicadas, instituciones o empresas del ámbito público o privado que requieran estudios de poblaciones de células o partículas subcelulares a alta velocidad. Posee un citómetro de flujo y clasificador celular de alta performance para estudios citométricos de poblaciones celulares y/o subcelulares, diversos análisis multiparamétricos y/o clasificación celular con elevadísima pureza de células animales o vegetales, presentando características técnicas muy destacadas para estudios de muestras microbiológicas y partículas pequeñas en escala nanométrica. Este servicio ha participado en numerosos proyectos de investigación básicos y aplicados, algunos en colaboración con otras instituciones de nuestro país y el exterior. Desde sus comienzos, con la incorporación de la clasificación celular por citometría de flujo al país, el SECIF continúa avanzando para el fortalecimiento de la citometría de flujo y clasificación celular en Uruguay.
Integrantes
Dra. Rosana Rodríguez-Casuriaga Miembro Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular. | |
Dra. Claudia Piccini Miembro Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular | |
Dr. Gustavo A. Folle Miembro asesor Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular | |
Mag. Federico Santiñaque Técnico Citometría de Flujo y Clasificación Celular | |
Mag. Ana Laura Reyes-Abalos Técnico asistente Citometría de Flujo y Clasificación Celular |
Contactos:
Comisión: Rosana Rodríguez-Casuriaga
Mail: rrodriguez@iibce.edu.uy; r.rodriguezcasuriaga@gmail.com
Técnico/reservas: Federico Santiñaque
Mail: federico.santinaque@gmail.com; fsantinaque@iibce.edu.uy
Teléfono: (598) 24871616 int. 218
Equipamiento:
El equipo corresponde a un citómetro de flujo y clasificador MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) adquirido con fondos de la Agencia Nacional de Investigación e Innovación (ANII) y del IIBCE con apoyo adicional de PEDECIBA. Presenta como característica saliente la detección simultánea de partículas con amplio rango dinámico (0,2 a 30 micras) lo que permitirá desarrollar nuevas áreas de aplicación de la citometría de flujo y clasificación celular en investigaciones tanto a nivel básico como aplicado. El equipo posee las siguientes características técnicas:
Óptica
El instrumento está equipado actualmente con 2 LASER (488 nm y 640 nm) con la siguiente configuración óptica de detección:
LASER 488 (filtros de banda y ejemplos de fluorocromos detectables)
488/6 Dispersión frontal (FSC1) con opción a colocación de máscaras P, S o M
488/6 Dispersión frontal (FSC2) con opción a colocación de máscaras P, S o M
488/6 Dispersión lateral (SSC)
513/26 Ej. FITC (Fluoresceína)
576/21 Ej. PE (Ficoeritrina)
620/29 Ej. PE-TR (Ficoeritrina-Texas Red)
664/22 Ej. PE-Cy5 (Ficoeritrina-Cianina 5)
710/45 Ej. PE-Cy5.5 (Ficoeritrina-Cianina 5.5)
795/70 Ej. PE-Cy7 (Ficoeritrina-Cianina 7)
LASER 640 nm
671/30 Ej. APC (Aloficocianina)
722/44 Ej. Alexa 700
795/70 Ej. (Aloficocianina-Cianina 7)
Total: 12 parámetros de detección
El haz (beam) del láser en la columna líquida es de tipo Flat top a nivel horizontal y gaussiana a nivel vertical proporcionando mayor estabilidad lumínica y facilitando la alineación.
Fluídica
En relación a la dinámica de fluidos, el equipo posee un compresor adecuado para manejo de presiones de líquido de vaina y de la muestra en un amplio rango (4-90 psi) con manejo combinado (manual/software) de los niveles de presión empleando boquillas de 70 y 100 micras. Además, posee un sistema automático para agitación periódica de la muestra a fin de mantener homogéneas las suspensiones biológicas durante los procesos de análisis o clasificación. También es posible colocar tubos de diferente volumen (0,5 a 50 mL) como recipiente para la muestra aparte del estándar (5 mL) lo que le confiere una gran versatilidad en el manejo de diferentes tipos de muestras.
Detección y análisis
Los fotomultiplicadores (PMTs) tienen capacidad de detección entre 185 a 900 nm (rango dinámico:10e5). Posee electrónica (procesamiento de señales) de 32 bits. La tasa de adquisición de datos es de 100.000 eventos por segundo con presión de 70psi. El instrumento alcanza una linearidad de 2.00 ± 0.05 y provee un constante y detallado control de calidad (QC) del funcionamiento del equipo durante las determinaciones.
Sensibilidad
La sensibilidad de fluorescencia determinada mediante el empleo del láser 488 nm y Spherotech 8-peak beads es de menor a 125 MESF (Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome) para FITC y menor a 110 MESF para PE.
Clasificación y deposición
El equipo es capaz de clasificar con muy alto grado de pureza (> 99%) células, microorganismos y elementos subcelulares a una tasa de hasta 70.000 eventos por segundo. Posee 6 vías de clasificación con la posibilidad de desarrollar en simultáneo clasificaciones en diferentes modos (enrich, purify, single). Posee un dispositivo sencillo y efectivo para la determinación y el monitoreo del punto de ruptura (Drop delay) de la columna líquida (IntelliSort), parámetro altamente crítico para asegurar el nivel de pureza en las clasificaciones. Por otra parte, trae incorporado un sistema de bloqueo rápido (SortRescue) en caso de existir alteraciones durante el desarrollo de la clasificación celular lo que protege la pureza de los eventos ya clasificados.
El citómetro Astrios EQ provee una amplia gama de posibles sustratos para la deposición de las células o partículas incluyendo tubos de diferente volumen, multipocillos de 6, 12, 24, 96, 384 y 1536 hoyos y portaobjetos con el dispositivo Cyclone. El equipo viene provisto de un efectivo sistema de contención y evacuación de aerosoles para protección del operador y del ambiente. Asimismo, cuenta con un eficiente sistema de regulación de la temperatura (± 0.2 ºC) para la muestra y los recipientes de clasificación.
Módulo EQ o Enhanced Forward Scatter (eFSC)
La capacidad analítica diferencial del Astrios EQ proviene del desarrollo de la tecnología denominada “enhanced Forward SCatter”(eFSC) o desviación frontal potenciada. El eFSC consiste en dos canales de FSC independientes (FSC-1 y FSC-2) con selección de 7 máscaras diferentes (P1, P2, P3, M1, M2, S1 y S2) sumado a un set de filtros neutrales ABS (0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 2.0 OD) para variadas aplicaciones. Además, la resolución del equipo es máxima ya que puede operar con niveles de umbral (triggering threshold) de 0.001%. Esta particular configuración torna posible el análisis y la separación en flujo una gran variedad de muestras de diferente origen. Para alcanzar esta capacidad única de detección, el equipo viene provisto de un conjunto de filtros necesarios para evitar el ingreso al sistema de fluidos de pequeñas partículas contaminantes no pertenecientes a la muestra y que generen background que puede interferir con las mediciones. El sistema de filtración incluye filtros de aire en serie de 0,01 µm y para el líquido de vaina de 0,04 µm.
Análisis
El SECIF cuenta con el software Summit (Beckman Coulter, USA) y Kaluza (Beckman Coulter, USA) para el análisis pormenorizado de los resultados de los estudios citométricos.
FOTOS DE REFERENCIA EQUIPAMIENTO SECIF:
MOFLO ASTRIOS EQ. CONFIGURACIÓN SORTING DE 6 VÍAS.
MOFLO ASTRIOS EQ – CONFIGURACIÓN ÓPTICA LASER 488nm
2 LASERS MOFLO ASTRIOS EQ E INTERCEPCIÓN FLUJO.
Cámara de Flujo Laminar de Bioseguridad
(Cytogarde, FluFrance)
Equipo MediMachine (Dako-Cytomation)
Instrumento de alta eficiencia para la disgregación de tejidos frescos, fijados o incluidos en tacos de parafina para su posterior análisis citométrico.
Publicaciones SECIF-IIBCE (2007-2023)
Artículos originales
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Divulgación
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Contactos:
Comisión: Rosana Rodríguez-Casuriaga
Mail: rrodriguez@iibce.edu.uy; r.rodriguezcasuriaga@gmail.com
Técnico/reservas: Federico Santiñaque
Mail: federico.santinaque@gmail.com; fsantinaque@iibce.edu.uy
Teléfono: (598) 24871616 int. 218