Servicio de Clasificación Celular y Citometría de Flujo (SECIF-IIBCE)
Perfil
El Servicio de Clasificación Celular y Citometría de Flujo (SECIF) constituye una plataforma tecnológica de apoyo a investigadores en áreas básicas o aplicadas, instituciones o empresas del ámbito público o privado que requieran estudios de poblaciones de células o partículas subcelulares a alta velocidad. Posee un citómetro de flujo y clasificador celular de alta performance para estudios citométricos de poblaciones celulares y/o subcelulares, diversos análisis multiparamétricos y/o clasificación celular con elevadísima pureza de células animales o vegetales, presentando características técnicas muy destacadas para estudios de muestras microbiológicas y partículas pequeñas en escala nanométrica. Este servicio ha participado en numerosos proyectos de investigación básicos y aplicados, algunos en colaboración con otras instituciones de nuestro país y el exterior. Desde sus comienzos, con la incorporación de la clasificación celular por citometría de flujo al país, el SECIF continúa avanzando para el fortalecimiento de la citometría de flujo y clasificación celular en Uruguay.
Integrantes
 | Dra. Rosana Rodríguez-Casuriaga Miembro Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular. |
 | Dra. Claudia Piccini Miembro Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular |
 | Dr. Gustavo A. Folle Miembro asesor Comisión Citometría de Flujo y Clasificación Celular |
 | Mag. Federico Santiñaque Técnico Citometría de Flujo y Clasificación Celular |
 | Mag. Ana Laura Reyes-Abalos Técnico asistente Citometría de Flujo y Clasificación Celular |
Contactos:
Comisión: Rosana Rodríguez-Casuriaga
Mail: rrodriguez@iibce.edu.uy; r.rodriguezcasuriaga@gmail.com
Técnico/reservas: Federico Santiñaque
Mail: federico.santinaque@gmail.com; fsantinaque@iibce.edu.uy
Teléfono: (598) 24871616 int. 218
Equipamiento:
El equipo corresponde a un citómetro de flujo y clasificador MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) adquirido con fondos de la Agencia Nacional de Investigación e Innovación (ANII) y del IIBCE con apoyo adicional de PEDECIBA. Presenta como característica saliente la detección simultánea de partículas con amplio rango dinámico (0,2 a 30 micras) lo que permitirá desarrollar nuevas áreas de aplicación de la citometría de flujo y clasificación celular en investigaciones tanto a nivel básico como aplicado. El equipo posee las siguientes características técnicas:
Óptica
El instrumento está equipado actualmente con 2 LASER (488 nm y 640 nm) con la siguiente configuración óptica de detección:
LASER 488 (filtros de banda y ejemplos de fluorocromos detectables)
488/6 Dispersión frontal (FSC1) con opción a colocación de máscaras P, S o M
488/6 Dispersión frontal (FSC2) con opción a colocación de máscaras P, S o M
488/6 Dispersión lateral (SSC)
513/26 Ej. FITC (Fluoresceína)
576/21 Ej. PE (Ficoeritrina)
620/29 Ej. PE-TR (Ficoeritrina-Texas Red)
664/22 Ej. PE-Cy5 (Ficoeritrina-Cianina 5)
710/45 Ej. PE-Cy5.5 (Ficoeritrina-Cianina 5.5)
795/70 Ej. PE-Cy7 (Ficoeritrina-Cianina 7)
LASER 640 nm
671/30 Ej. APC (Aloficocianina)
722/44 Ej. Alexa 700
795/70 Ej. (Aloficocianina-Cianina 7)
Total: 12 parámetros de detección
El haz (beam) del láser en la columna líquida es de tipo Flat top a nivel horizontal y gaussiana a nivel vertical proporcionando mayor estabilidad lumínica y facilitando la alineación.
Fluídica
En relación a la dinámica de fluidos, el equipo posee un compresor adecuado para manejo de presiones de líquido de vaina y de la muestra en un amplio rango (4-90 psi) con manejo combinado (manual/software) de los niveles de presión empleando boquillas de 70 y 100 micras. Además, posee un sistema automático para agitación periódica de la muestra a fin de mantener homogéneas las suspensiones biológicas durante los procesos de análisis o clasificación. También es posible colocar tubos de diferente volumen (0,5 a 50 mL) como recipiente para la muestra aparte del estándar (5 mL) lo que le confiere una gran versatilidad en el manejo de diferentes tipos de muestras.
Detección y análisis
Los fotomultiplicadores (PMTs) tienen capacidad de detección entre 185 a 900 nm (rango dinámico:10e5). Posee electrónica (procesamiento de señales) de 32 bits. La tasa de adquisición de datos es de 100.000 eventos por segundo con presión de 70psi. El instrumento alcanza una linearidad de 2.00 ± 0.05 y provee un constante y detallado control de calidad (QC) del funcionamiento del equipo durante las determinaciones.
Sensibilidad
La sensibilidad de fluorescencia determinada mediante el empleo del láser 488 nm y Spherotech 8-peak beads es de menor a 125 MESF (Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome) para FITC y menor a 110 MESF para PE.
Clasificación y deposición
El equipo es capaz de clasificar con muy alto grado de pureza (> 99%) células, microorganismos y elementos subcelulares a una tasa de hasta 70.000 eventos por segundo. Posee 6 vías de clasificación con la posibilidad de desarrollar en simultáneo clasificaciones en diferentes modos (enrich, purify, single). Posee un dispositivo sencillo y efectivo para la determinación y el monitoreo del punto de ruptura (Drop delay) de la columna líquida (IntelliSort), parámetro altamente crítico para asegurar el nivel de pureza en las clasificaciones. Por otra parte, trae incorporado un sistema de bloqueo rápido (SortRescue) en caso de existir alteraciones durante el desarrollo de la clasificación celular lo que protege la pureza de los eventos ya clasificados.
El citómetro Astrios EQ provee una amplia gama de posibles sustratos para la deposición de las células o partículas incluyendo tubos de diferente volumen, multipocillos de 6, 12, 24, 96, 384 y 1536 hoyos y portaobjetos con el dispositivo Cyclone. El equipo viene provisto de un efectivo sistema de contención y evacuación de aerosoles para protección del operador y del ambiente. Asimismo, cuenta con un eficiente sistema de regulación de la temperatura (± 0.2 ºC) para la muestra y los recipientes de clasificación.
Módulo EQ o Enhanced Forward Scatter (eFSC)
La capacidad analítica diferencial del Astrios EQ proviene del desarrollo de la tecnología denominada “enhanced Forward SCatter”(eFSC) o desviación frontal potenciada. El eFSC consiste en dos canales de FSC independientes (FSC-1 y FSC-2) con selección de 7 máscaras diferentes (P1, P2, P3, M1, M2, S1 y S2) sumado a un set de filtros neutrales ABS (0.3, 0.6, 1.0, 1.3, 2.0 OD) para variadas aplicaciones. Además, la resolución del equipo es máxima ya que puede operar con niveles de umbral (triggering threshold) de 0.001%. Esta particular configuración torna posible el análisis y la separación en flujo una gran variedad de muestras de diferente origen. Para alcanzar esta capacidad única de detección, el equipo viene provisto de un conjunto de filtros necesarios para evitar el ingreso al sistema de fluidos de pequeñas partículas contaminantes no pertenecientes a la muestra y que generen background que puede interferir con las mediciones. El sistema de filtración incluye filtros de aire en serie de 0,01 µm y para el líquido de vaina de 0,04 µm.
Análisis
El SECIF cuenta con el software Summit (Beckman Coulter, USA) y Kaluza (Beckman Coulter, USA) para el análisis pormenorizado de los resultados de los estudios citométricos.
FOTOS DE REFERENCIA EQUIPAMIENTO SECIF:
MOFLO ASTRIOS EQ. CONFIGURACIÓN SORTING DE 6 VÍAS.
MOFLO ASTRIOS EQ – CONFIGURACIÓN ÓPTICA LASER 488nm
2 LASERS MOFLO ASTRIOS EQ E INTERCEPCIÓN FLUJO.
Cámara de Flujo Laminar de Bioseguridad
(Cytogarde, FluFrance)
Equipo MediMachine (Dako-Cytomation)
Instrumento de alta eficiencia para la disgregación de tejidos frescos, fijados o incluidos en tacos de parafina para su posterior análisis citométrico.
Publicaciones SECIF-IIBCE (2007-2023)
Artículos originales
Rodríguez-Casuriaga R , Geisinger A. Contributions of Flow Cytometry to the Molecular Study of Spermatogenesis in Mammals. Int J Mol Sci. 2021 Jan 25;22(3):1151. doi: 10.3390/ijms22031151.
Hernández-López D, Geisinger A, Trovero MF, Santiñaque FF, Brauer M, Folle GA, Benavente R, Rodríguez-Casuriaga R. Familial primary ovarian insufficiency associated with an SYCE1 point mutation: defective meiosis elucidated in humanized mice. Mol Hum Reprod. 2020 Jul 1;26(7):485-497. doi: 10.1093/molehr/gaaa032.
Castillo A, López V, Tavares E, Santiñaque FF, Rizza Dalla M. Polyploid induction of Eucalyptus dunnii Maiden to generate variability in breeding programs. Agrociencia (Uruguay), 2020, 24(spe2), e381. https://doi.org/10.31285/agro.24.381
Hernández-López D , Benavente R , Geisinger A, Trovero F, Santiñaque FF, Folle GA, Rodríguez-Casuriaga R. Chromosome Synapsis During Gametogenesis of Humanized Mice Carrying a Point Mutation in the Syce1 Gene. Microsc. Microanal. 26 (Suppl 1), 2020. doi:10.1017/S1431927620000410
Trovero MF, Rodríguez-Casuriaga R, Romeo C, Santiñaque FF, François M, Folle GA, Benavente R, Sotelo-Silveira JR, Geisinger A. Revealing stage-specific expression patterns of long noncoding RNAs along mouse spermatogenesis. RNA Biol. 2020 Mar;17(3):350-365. doi: 10.1080/15476286.2019.1700332.
Gaiero P, Šimková H, Vrána J, Santiñaque FF, López-Carro B, Folle GA, van de Belt J, Peters SA, Doležel J, de Jong H (2018) Intact DNA purified from flow-sorted nuclei unlocks the potential of next-generation genome mapping and assembly in Solanum species. MethodsX 5:328-336.
Geisinger A, Rodríguez-Casuriaga R (2017) Flow cytometry for the isolation and characterization of rodent meiocytes. Methods in Molecular Biology, Special Edition on Meiosis 1471: 217-230. doi: 10.1007/978-1-4939-6340-9-11
González AC, Vaio M, Porro V, Folle GA, Mazzella C (2017) Chromosome numbers, DNA content, morphological data, and nrITS sequence analyses in some species of Nassella (Trin.) E. Desv. and related genera (Stipeae, Poaceae). Brazilian Journal of Botany 40(1): 341-352. doi : 10.1007/s40415-016-0337-0
Castillo A, Gaiero P, López-Carro B, Vilaró F (2016) Gametic embryonic response in wild diploid Solanum species and its implications for genome sequencing projects and breeding. Plant Tissue Culture and Biotechnology 26(2): 175-189.
Bauk K, Santiñaque FF, López-Carro B, LasPeñas ML (2016) ADN y patrón de genes ribosomales en el género monotípico Stetsonia (Cactaceae). Bol Soc Argent Bot. 51: 323-330.
da Cruz I, Rodríguez-Casuriaga R, Santiñaque FF, Farías J, Curti G, Capoano CA, Folle GA, Benavente R, Sotelo-Silveira JR, Geisinger A (2016) Transcriptome analysis of highly purified mouse spermatogenic cell populations: gene expression signatures switch from meiotic-to postmeiotic-related processes at pachytene stage. BMC Genomics 17:294. doi: 10.1186/s12864-016-2618-1
García EP, Tiscornia I, Libisch G, Trajtenberg F, Bollati-Fogolín M, Rodríguez E, Noya V, Chiale C, Brossard N, Robello C, Santiñaque FF, Folle GA, Osinaga E, Freire T (2016) MUC5B silencing reduces chemo-resistance of MCF-7 breast tumor cells and impairs maturation of dendritic cells. International Journal of Oncology 48(5): 2113-2123.
Paviolo NS, Santiñaque FF, Castrogiovanni DC, Folle GA, Bolzán AD (2015) The methylating agent streptozotocin induces persistent telomere dysfunction in mammalian cells. Mutat Res Genet Toxicol Environ Mutagen 794:17-24.
Goldman A, Rodríguez-Casuriaga R, González-López E, Capoano CA, Santiñaque FF, Geisinger A (2015). MTCH2 is differentially expressed in rat testis and mainly related to apoptosis of spermatocytes. Cell and Tissue Research 361: 869-883.
Romanelli G, Olivera-Bravo S, Santiñaque FF, Soto E, Javiel G, López-Carro B, Folle GA, Mimbacas A (2015) P-Selectin as a platelet activation marker and cardiovascular risk prediction factor. Differences between its two isoforms using flow cytometry and Elisa analyses. J J Hematology 1: 017.
Rodríguez-Casuriaga R, Santiñaque FF, Folle GA, Souza E, López-Carro B, Geisinger A (2014) Rapid preparation of rodent testicular cells suspensions and spermatogenic stages purification by flow cytometry using a novel blue-laser-excitable vital dye. Methods X 1: e239-e243.
Geisinger A, Rodríguez-Casuriaga R, Santiñaque FF, Folle GA (2014) Revisiting testicular cell suspensions and meiocytes sorting (Commentary). Cytometry 85: 989-990
Las Peñas ML, Urdampilleta JD, López-Carro B, Santiñaque FF, Kiesling R, Bernardello G (2014) Classical and molecular cytogenetics and DNA content in Maihuenia and Pereskia (Cactaceae). Plant Systematics and Evolution 300: 549-558.
García G, Gutiérrez V, Ríos N, Turner B, Santiñaque F, López-Carro B, Folle G (2014) Burst speciation processes and genomic expansion in the neotropical annual killifish genus Austrolebias (Cyprinodontiformes, Rivulidae). Genetica 142: 87-98.
Rodríguez-Casuriaga R, Folle GA, Santiñaque FF, López-Carro B, Geisinger A (2013) Simple and Efficient Technique for the Preparation of Testicular Cell Suspensions. Journal of Visualized Experiments (JoVE) e50102. doi:10.3791/50102.
Chiarini F, Santiñaque FF, Urdampilleta J, Las Peñas ML (2013). Genome size and karyotype diversity in Solanum sect. Acanthophora (Solanaceae). Plant Systematics and Evolution 300: 113-125.
Reyno R, Narancio R, Speranza P, Do Canto J, López-Carro B, Burgueño J, Real D, Dalla Rizza M (2012) Molecular and cytogenetic characterization of a collection of bahiagrass (Paspalum notattum Flügge) native to Uruguay. Genetic Resources and Crop Evolution 59: 1823-1832.
Gaiero P, Mazzella C, Vaio M, Barros e Silva A, Santiñaque FF, López-Carro B, Folle G , Guerra M (2012) An unusually high heterochromatin content and large genome size in the palm tree Trithrinax campestris (Arecaceae). Australian Journal of Botany 60: 378-382.
Castillo A, Rebuffo M, Dalla Rizza M, Folle GA, Santiñaque FF, Borsani O, Monza J (2012) Generation and characterization of inter-specific hybrids of Lotus uliginosus x L. corniculatus. Crop Science 52: 1-11.
Scaldaferro M, Chiarini F, Santiñaque FF, Bernardello G, Moscone E (2012) Geographical pattern and ploidy levels of the weed Solanum elaeagnifolium (Solanaceae) from Argentina. Genetic Resources and Crop Evolution 59: 1833-1847
Rodríguez-Casuriaga R (2012) El cobayo como modelo de estudio de la gametogénesis masculina: análisis de sus peculiaridades y desarrollo de nuevos abordajes metodológicos. Libro integral. Editorial Académica Española, Lambert Academic Publishing GmbH & Co, KG, Saarbrücken, pp161.
Rehermann MI, Santiñaque FF, López-Carro B, Russo RE, Trujillo-Cenóz O (2011) Cell proliferation and cytoarchitectural remodeling during spinal cord reconnection in the fresh-water turtle Trachemis dorbignyi. Cell Tissue Research 344: 415-433.
Rodríguez-Casuriaga R, Geisinger A, Santiñaque FF, López-Carro B, Folle GA (2011) High-purity flow sorting of early meiocytes based on DNA analysis of guinea pig spermatogenic cells. Cytometry Part A 79:625-634.
Geisinger A, Rodríguez-Casuriaga R (2010). Flow cytometry for gene expression studies of mammalian spermatogenesis”. Cytogen. Genome Res 128: 46-56.
Mazzella C, Rodríguez M, Vaio M, Gaiero P, López-Carro B, Santiñaque FF, Folle G, Guerra, M (2010) Karyological features of Achyrocline (Asteraceae, Gnaphalieae): stable karyotypes, low DNA content variation and rRNA genes linkage. Cytogenetic and Genome Research 128:169-176.
Rodríguez-Casuriaga R, Geisinger A, López-Carro B, Porro V, Wettstein R, Folle GA (2009) Ultra-fast and optimized method for the preparation of rodent testicular cells by flow cytometric analyses. Biological Procedures Online 10: 113-120. DOI 10.1007/s12575-009-9003-2.
Dalla Rizza M, Real D, Reyno R, Porro V, Errico E, Quesenberry KH (2007) Genetic diversity and DNA content of three South American and three Eurasiatic Trifolium species. Genetics and Molecular Biology 30: 1118-1124.
Vaio M, Mazzella C, Porro V, Speranza P, López-Carro B, Estramil E, Folle GA (2007) Nuclear DNA content in allopolyploid species and synthetic hybrids in the grass genus Paspalum. Plant Systematics and Evolution 265: 109-121
Divulgación
Santiñaque FF, López-Carro B, Folle GA (2009) Un aporte a la selección de semillas. Almanaque del Banco de Seguros del Estado pp 214-216.
Contactos:
Comisión: Rosana Rodríguez-Casuriaga
Mail: rrodriguez@iibce.edu.uy; r.rodriguezcasuriaga@gmail.com
Técnico/reservas: Federico Santiñaque
Mail: federico.santinaque@gmail.com; fsantinaque@iibce.edu.uy
Teléfono: (598) 24871616 int. 218